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豬ELISA試劑盒試驗注意事項要點

更新時間:2023-04-11    點擊次數(shù):1672

  豬ELISA試劑盒試驗注意事項要點


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  本生提醒:ELISA實驗前的注意事項

  1、仔細(xì)閱讀說明書

  2、確定試劑盒在有效期內(nèi)

  3、按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)

  4、標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者,注意低溫保存

  5、準(zhǔn)備好所有實驗額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等

  6、根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量

  7、按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑

  ELISA試驗時,注意事項如下:

  1.正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

  2.在ELISA中,進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

  (1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

  (2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。

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